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    1. 產品中心

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      當前位置:首頁產品中心實驗試劑試劑盒JYM0654Ra大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA Kit

      大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA Kit

      產品簡介

      大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA Kit,產品編碼:JYM0654Ra
      Rat Interferonγ(IFN-γ)ELISA Kit
      有效期:6個月
      保存條件:2-8℃

      更新時間:2024-03-19
      瀏覽次數:104

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      品牌基因美供貨周期現貨
      應用領域醫療衛生,化工,生物產業,制藥,綜合

      大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA Kit,產品編碼:JYM0654Ra

      大鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA Kit,Rat Interferonγ(IFN-γ)ELISA Kit

      【實驗方法】雙抗體夾心法

      【種屬】大鼠

      【檢測范圍】 見說明書

      【檢測波長】450 nm

      【樣本類型】血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本 

      【反應時間】 1.5~2h


      大鼠γ干擾素(IFN-γ)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書

      本試劑盒僅供科研使用。

      本試劑盒用于體外定量檢測大鼠血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中γ干擾素(IFN-γ)的含量。

      有效期:6個月

      保存條件:2-8℃

      實驗原理

      本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠γ干擾素(IFN-γ)水平。用純化的大鼠γ干擾素(IFN-γ)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入γ干擾素(IFN-γ),再與HRP標記的γ干擾素(IFN-γ)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成很終的黃色。顏色的深淺和樣品中的γ干擾素(IFN-γ)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠γ干擾素(IFN-γ)濃度。

      試劑盒組成

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      樣本處理及要求

      1.血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。 

      2. 血漿:應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。 

      3. 尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 

      4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

      5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。 

      6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融. 

      7. 不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

      操作步驟

      1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔 10 孔,在第一、第二孔中分別加標準品 100μl,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,再各取 50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50μl,濃度分別為 180pg/ml, 120pg/ml, 60pg/ml, 30pg/ml, 15pg/ml)。

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      2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品很終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。 

      3. 加酶:每孔加入酶標試劑 50ul,空白孔除外。 

      4. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。 

      5. 配液:將 30(48T 的 20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30(48T 的 20 倍)倍稀釋后備用。 

      6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。 

      7. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50ul,再加入顯色劑 B50ul,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 10 分鐘。

      8. 終止:每孔加終止液 50ul,終止反應(此時藍色立轉黃色)。 

      9. 測定:以空白孔調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

      注意事項

      1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。 

      2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。 

      3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間很好控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 

      4. 請每次測定的同時做標準曲線,很好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD值大于標準品孔第一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計算時請很后乘以總稀釋倍數(×n×5)。 

      5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 

      6. 底物請避光保存。 

      7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準. 

      8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 

      9. 本試劑不同批號組分不得混用。 

      10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

      計算

      以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

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      試劑盒性能

      1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值為 0.92 以上。

      2.批內與批間應分別小于 9%和 15%

      檢測范圍

      3.3pg/ml -200pg/ml


      上海寶葉生物科技有限公司

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